First case of canine visceral leishmaniasis in the midwestern of Santa Catarina State, Brazil / Primeiros casos de leishmaniose visceral canina no Meio-oeste do Estado de Santa Catarina, Brasil

Canine visceral leishmaniasis (CVL) caused by Leishmania (Leishmania) infantum is transmitted by phlebotomine sandflies and a major zoonotic disease in Brazil. Due to the southward expansion of the disease within the country and the central role of dogs as urban reservoirs of the parasite, we have investigated the occurrence of CVL in two municipalities Erval Velho and Herval d'Oeste in the Midwest region of Santa Catarina state. Peripheral blood samples from 126 dogs were collected in both cities and tested for anti-L. infantum antibodies by indirect enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence reaction (IIF) and for the presence of parasite DNA by polymerase chain reaction (PCR) in peripheral blood. From examined dogs, 35.71% (45/126) were positive for at least one of the three tests and two (1.6%) were positive in all performed tests. Twelve dogs (9.5%) were positive for both ELISA and IIF, while 21 dogs were exclusively positive for ELISA (16.7%), and 15 (11.9%) for IIF. L. infantum k-DNA was detected by PCR in 9 out of 126 dogs (7.1%) and clinical symptoms compatible with CVL were observed for 6 dogs. Taken together, these results indicate the transmission of CVL in this region, highlighting the needs for epidemiological surveillance and implementation of control measures for CVL transmission in this region.

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) causada pela Leishmania (Leishmania) infantum e transmitida por flebotomíneos e é uma das principais zoonoses do Brasil que se encontra em expansão em estados da região sul do país, sendo os cães o principal reservatório urbano do parasito. O presente estudo investigou a ocorrência de LVC em dois municípios, Erval Velho e Herval d'Oeste localizados no meio-oeste de Santa Catarina. Para tanto, amostras de sangue periférico de 126 cães foram coletadas em ambas as cidades e submetidas à detecção de anticorpos anti-L. infantum por meio de testes de ELISA e imunofluorescência indireta (IFI), bem com a detecção de k-DNA pela reação em cadeia de polimerase (PCR). Além disso, também foram observados os sintomas clínicos e as condições ambientais associadas a esses animais. Dos cães examinados, 35,7% (45/126) foram positivos para pelo menos um dos três testes, dois cães (1,6%) foram positivos em todos os três testes, 12 cães (9,5%) foram positivos tanto no ELISA quanto na IFI, enquanto 21 cães (16,7%) foram positivos para ELISA e 15 (11,9%) para o IFI. A amplificação do k-DNA de L. infantum foi positiva em 9 dos 126 cães (7,1%). Entre os cães positivos seis apresentaram um ou mais sintomas clínicos correlacionados com a LVC. Esses resultados confirmaram a ocorrência de LVC na região e destacaram a importância do monitoramento e implementação de medidas de controle para a LVC nessa região.

First case of canine visceral leishmaniasis in the midwestern of Santa Catarina State, Brazil / Primeiros casos de leishmaniose visceral canina no Meio-oeste do Estado de Santa Catarina, Brasil

Canine visceral leishmaniasis (CVL) caused by Leishmania (Leishmania) infantum is transmitted by phlebotomine sandflies and a major zoonotic disease in Brazil. Due to the southward expansion of the disease within the country and the central role of dogs as urban reservoirs of the parasite, we have investigated the occurrence of CVL in two municipalities Erval Velho and Herval d'Oeste in the Midwest region of Santa Catarina state. Peripheral blood samples from 126 dogs were collected in both cities and tested for anti-L. infantum antibodies by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence reaction (IIF) and for the presence of parasite DNA by polymerase chain reaction (PCR) in peripheral blood. From examined dogs, 35.71% (45/126) were positive for at least one of the three tests and two (1.6%) were positive in all performed tests. Twelve dogs (9.5%) were positive for both ELISA and IIF, while 21 dogs were exclusively positive for ELISA (16.7%), and 15 (11.9%) for IIF. L. infantum k-DNA was detected by PCR in 9 out of 126 dogs (7.1%) and clinical symptoms compatible with CVL were observed for 6 dogs. Taken together, these results indicate the transmission of CVL in this region, highlighting the needs for epidemiological surveillance and implementation of control measures for CVL transmission in this region.

A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) causada pela Leishmania (Leishmania) infantum e transmitida por flebotomíneos e é uma das principais zoonoses do Brasil que se encontra em expansão em estados da região sul do país, sendo os cães o principal reservatório urbano do parasito. O presente estudo investigou a ocorrência de LVC em dois municípios, Erval Velho e Herval d’Oeste localizados no meio-oeste de Santa Catarina. Para tanto, amostras de sangue periférico de 126 cães foram coletadas em ambas as cidades e submetidas à detecção de anticorpos anti-L. infantum por meio de testes de ELISA e imunofluorescência indireta (IFI), bem com a detecção de k-DNA pela reação em cadeia de polimerase (PCR). Além disso, também foram observados os sintomas clínicos e as condições ambientais associadas a esses animais. Dos cães examinados, 35,7% (45/126) foram positivos para pelo menos um dos três testes, dois cães (1,6%) foram positivos em todos os três testes, 12 cães (9,5%) foram positivos tanto no ELISA quanto na IFI, enquanto 21 cães (16,7%) foram positivos para ELISA e 15 (11,9%) para o IFI. A amplificação do k-DNA de L. infantum foi positiva em 9 dos 126 cães (7,1%). Entre os cães positivos seis apresentaram um ou mais sintomas clínicos correlacionados com a LVC. Esses resultados confirmaram a ocorrência de LVC na região e destacaram a importância do monitoramento e implementação de medidas de controle para a LVC nessa região.

The path of canine visceral leishmaniasis versus the path of Center for Zoonoses Control: contributions of spatial analysis to health / O caminho da leishmaniose visceral canina versus o caminho do Centro de Controle de Zoonoses: contribuições da análise espacial para a saúde / La trayectoria de la leishmaniasis visceral canina versus la trayectoria del Centro para el Control de Zoonoses: contribuciones del análisis espacial a la salud

Visceral leishmaniasis (VL) is a public health problem in Brazilian municipalities. As much as there is a planning of public policies regards VL in São Paulo State, new cases have been reported and spread. This paper aims to discuss how the Center for Zoonoses Control conducts its actions spatially in endemic city of Presidente Prudente, São Paulo State. Data are from the Municipal Health Department of Presidente Prudente, Adolfo Lutz Institute, and Brazilian Institute of Geography and Statistics. We spatially estimated the dog population per census tract and used geoprocessing tools to perform choropleth maps, spatial trends, and spatial autocorrelation. We found a spatial pattern of higher prevalence in the city's outskirt and a positive statistically significant spatial autocorrelation (I = 0.2, p-value < 0.000) with clusters of high-high relationships in the Northwest part of the city. Moreover, we identified a different direction in the path of the conducted serosurveys versus the canine VL trend, which stresses the fragility of the Center for Zoonoses Control actions to control the disease. The Center for Zoonoses Control always seems to chase the disease. The spatial analysis may be useful for rethinking how the service works and helps in public policies.

A leishmaniose visceral (LV) é um problema de saúde pública nas cidades brasileiras. Por mais que haja um planejamento de políticas públicas para LV no Estado de São Paulo, Brasil, novos casos têm sido notificados e se disseminado. O artigo objetiva discutir como o Centro de Controle de Zoonoses realiza suas atividades espacialmente em uma cidade endêmica, Presidente Prudente, no Estado de São Paulo. Os dados são da Secretaria Municipal de Saúde de Presidente Prudente, Instituto Adolfo Lutz e Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Estimamos espacialmente a população canina por setor censitário e utilizamos ferramentas de geoprocessamento para produzir mapas coropléticos, tendências espaciais e autocorrelação espacial. Encontramos um padrão espacial de maior prevalência na periferia da cidade e uma autocorrelação espacial positiva estatisticamente significativa (I = 0,2; p < 0,000) com clusters de relação alta-alta no noroeste da cidade. Além disso, identificamos uma direção diferente no caminho dos inquéritos sorológicos realizados versus a tendência na LV canina, o que enfatiza a fragilidade das medidas de controle do Centro de Controle de Zoonoses para controlar casos da doença. O Centro de Controle de Zoonoses parece estar sempre correndo atrás da doença. A análise espacial pode ser útil para repensar o funcionamento do serviço e auxiliar as políticas públicas.

La leishmaniasis visceral (LV) es un problema de salud pública en las ciudades brasileñas. Aunque hay políticas públicas de planificación relacionadas con la LV en el estado de São Paulo, Brasil, se han informado de nuevos casos, además de su propagación. El objetivo de este trabajo es discutir cómo el Centro de Control de Zoonosis dirige sus acciones espacialmente en una ciudad endémica del estado de São Paulo, Presidente Prudente. Los datos proceden de la Secretaría Municipal de Salud de Presidente Prudente, del Instituto Adolfo Lutz, y del Instituto Brasileño de Geografía y Estadística. Estimamos espacialmente la población de perros por sector censal y utilizamos herramientas de geoprocesamiento para elaborar mapas de coropletas, tendencias espaciales, y autocorrelación espacial. Encontramos un patrón espacial de más alta prevalencia en la periferia de la ciudad, además de una autocorrelación espacial positiva y estadísticamente significativa (I = 0,2; valor de p < 0,000) con clústeres de relaciones alto-alto en la parte noroccidental de la ciudad. Además, identificamos una dirección diferente en la trayectoria de las encuestas serológicas llevadas a cabo, frente a la tendencia de LV canina, que enfatiza la debilidad de acciones del Centro de Control de Zoonosis para controlar casos de la enfermedad. El Centro de Control de Zoonosis parece siempre estar tras la enfermedad. El análisis espacial podría ser útil para repensar cómo está funcionando el servicio, además de ayudar a políticas públicas.

Leishmaniose visceral em um Pastor Belga: relato de caso / Visceral leishmaniasis in a Belgian Pastor: case report

O presente trabalho tem como objetivo relatar um caso de um Pastor Belga, do município de Ponta Porã, Mato Grosso do Sul, positivo para Leishmaniose Visceral, atendido em 2017 em uma clínica veterinária localizada em Pedro Juan Caballero, Paraguai. O diagnóstico foi confirmado através dos sinais clínicos característicos, e dos exames ELISA e PCR positivos. O animal foi submetido ao tratamento clínico para melhora dos sintomas, cujo tratamento antiparasitário inicial foi realizado com a associação de estibogluconato de sódio 75 mg/kg e alopurinol 100 mg seguido de aloputinol 100mg de uso contínuo e uso da coleira antileishmaniose. Tratamento esse considerado eficiente, com melhora clínica do animal. Após 24 meses o animal foi diagnosticado com tumor de mama e lesão da bolsa escrotal, sendo submetido a tratamento clínico e cirúrgico. Com 30 e 36 meses do diagnóstico inicial repetiu-se os exames ELISA (positivo) e PCR (negativo), e então o animal foi considerado curado clinicamente devido à ausência de sinais clínicos. Tendo em vista a complexidade dos fatores no ciclo de transmissão, conclui-se que as medidas em saúde ainda são insuficientes para o controle efetivo da doença. É importante o papel do Médico Veterinário na saúde pública, devido a obrigatoriedade de notificação de casos de Leishmaniose Visceral Canina, sendo necessários esforços nas diferentes áreas da saúde animal, humana e do meio ambiente, visando medidas de vigilância e controle da doença no país.

The present work aims to report a case of a Belgian Shepherd, from the municipality of Ponta Porã, Mato Grosso do Sul, positive for Visceral Leishmaniasis, treated in 2017 in a veterinary clinic located in Pedro Juan Caballero, Paraguay. The diagnosis was confirmed through the characteristic clinical signs, and the positive ELISA and PCR tests. The animal was submitted to clinical treatment for improvement of symptoms, whose initial antiparasitic treatment was performed with the association of sodium stibogluconate 75 mg/kg and allopurinol 100 mg followed by alloputinol 100mg of continuous use and use of the antileishmaniasis collar. This treatment was considered efficient, with clinical improvement of the animal. After 24 months the animal was diagnosed with a breast tumor and scrotum injury, and was submitted to clinical and surgical treatment. At 30 and 36 months from the initial diagnosis, the ELISA tests (positive) and PCR (negative) were repeated, and then the animal was considered clinically cured due to the absence of clinical signs. Considering the complexity of the factors in the transmission cycle, it is concluded that the health measures are still insufficient for the effective control of the disease. The role of the veterinarian in public health is important, due to the obligatory notification of cases of Canine Visceral Leishmaniasis, being necessary efforts in the different areas of animal health, human and environment, aiming at measures of surveillance and control of the disease in the country.

Leishmaniose visceral em um Pastor Belga: relato de caso / Visceral leishmaniasis in a Belgian Pastor: case report

O presente trabalho tem como objetivo relatar um caso de um Pastor Belga, do município de Ponta Porã, Mato Grosso do Sul, positivo para Leishmaniose Visceral, atendido em 2017 em uma clínica veterinária localizada em Pedro Juan Caballero, Paraguai. O diagnóstico foi confirmado através dos sinais clínicos característicos, e dos exames ELISA e PCR positivos. O animal foi submetido ao tratamento clínico para melhora dos sintomas, cujo tratamento antiparasitário inicial foi realizado com a associação de estibogluconato de sódio 75 mg/kg e alopurinol 100 mg seguido de aloputinol 100mg de uso contínuo e uso da coleira antileishmaniose. Tratamento esse considerado eficiente, com melhora clínica do animal. Após 24 meses o animal foi diagnosticado com tumor de mama e lesão da bolsa escrotal, sendo submetido a tratamento clínico e cirúrgico. Com 30 e 36 meses do diagnóstico inicial repetiu-se os exames ELISA (positivo) e PCR (negativo), e então o animal foi considerado curado clinicamente devido à ausência de sinais clínicos. Tendo em vista a complexidade dos fatores no ciclo de transmissão, conclui-se que as medidas em saúde ainda são insuficientes para o controle efetivo da doença. É importante o papel do Médico Veterinário na saúde pública, devido a obrigatoriedade de notificação de casos de Leishmaniose Visceral Canina, sendo necessários esforços nas diferentes áreas da saúde animal, humana e do meio ambiente, visando medidas de vigilância e controle da doença no país.

The present work aims to report a case of a Belgian Shepherd, from the municipality of Ponta Porã, Mato Grosso do Sul, positive for Visceral Leishmaniasis, treated in 2017 in a veterinary clinic located in Pedro Juan Caballero, Paraguay. The diagnosis was confirmed through the characteristic clinical signs, and the positive ELISA and PCR tests. The animal was submitted to clinical treatment for improvement of symptoms, whose initial antiparasitic treatment was performed with the association of sodium stibogluconate 75 mg/kg and allopurinol 100 mg followed by alloputinol 100mg of continuous use and use of the antileishmaniasis collar. This treatment was considered efficient, with clinical improvement of the animal. After 24 months the animal was diagnosed with a breast tumor and scrotum injury, and was submitted to clinical and surgical treatment. At 30 and 36 months from the initial diagnosis, the ELISA tests (positive) and PCR (negative) were repeated, and then the animal was considered clinically cured due to the absence of clinical signs. Considering the complexity of the factors in the transmission cycle, it is concluded that the health measures are still insufficient for the effective control of the disease. The role of the veterinarian in public health is important, due to the obligatory notification of cases of Canine Visceral Leishmaniasis, being necessary efforts in the different areas of animal health, human and environment, aiming at measures of surveillance and control of the disease in the country.

Phase II validation study of the rK39 ELISA prototype for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil / Estudo de validação da fase II do teste ELISA rK39 para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil / Estudio de validación de la fase II del test ELISA rK39 para el diagnóstico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Intense transmission of visceral leishmaniasis in a region of northeastern Brazil: a situation analysis after the discontinuance of a zoonosis control program / Transmissão intensa da Leishmaniose Visceral em região do Nordeste do Brasil: uma análise após a descontinuidade do programa de controle de zoonoses

Abstract In São Luís, Maranhão, northeastern Brazil, the notification of visceral leishmaniasis (VL) cases intensified in 1982, showing endemic and epidemic patterns. In this city, the Center for Zoonoses Control (CZC) was an organization in charge of the control and prevention of the disease. However, technical and political reasons have led to a significant decline in the periodicity of its activities. Therefore, in this study we evaluated the epidemiological scenario of human visceral leishmaniasis (HVL) and the prevalence of the disease in dogs after the cessation of the CZC activities, covering the period of 2007 to 2016. The seroprevalence of canine leishmaniasis was determined based on clinical and serological profiles. HVL cases were notified using data provided by the Municipal Health Department of São Luís. A seropositivity rate of 45.8% (p = 0.0001) was found among dogs, 54% (p = 0.374) of which were asymptomatic. As for human cases, there were 415 notifications, with an increase in the incidence of the zoonosis observed during the aforementioned period. Thus, it can be inferred that after the control and surveillance activities were curtailed, there was an increase in the number of seropositive animals in circulation, acting as reservoirs of infection for dogs and humans.

Resumo Em São Luís, Maranhão, região Nordeste do Brasil, a notificação de casos de Leishmaniose Visceral (LV) intensificou-se em 1982, com padrão epidêmico e endêmico. Nessa cidade, o Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) era uma entidade que realizava ações de controle e prevenção da doença, mas, nos últimos anos, a periodicidade de suas atividades reduziram-se significativamente, devido a diversos fatores técnico-políticos. Portanto, neste estudo avaliou-se o cenário epidemiológico da leishmaniose visceral humana (LVH) e a prevalência da doença em cães, após a descontinuidade das atividades do CCZ, no período de 2007-2016. A soroprevalência canina foi determinada de acordo com o perfil clínico e a sorologia. Os casos notificados de LVH foram realizados a partir de dados da Secretaria Municipal de Saúde de São Luís. Observou-se frequência de 45,8% (p = 0,0001) de cães soropositivos, dos quais 54% (p = 0,374) eram assintomáticos. Em relação aos casos humanos, ocorreram 415 notificações, com aumento na incidência das zoonoses observada no período. Assim, pode-se inferir que, com a interrupção das atividades de controle e vigilância, houve um grande número de animais circulantes positivos, atuando como fonte de infecção tanto para cães quanto para humanos.

Factors associated with Leishmania infection in dogs and geospatial analysis in the Sertão of Paraíba, Northeast Brazil / Fatores associados à infecção por Leishmania em cães e análise espacial no Sertão da Paraíba, Nordeste do Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis with a worldwide distribution that has a major impact on public health. The aim of this study was to verify the prevalence of canine infection by Leishmania infantum, the factors associated with the infection and its spatial distribution in the municipality of Mãe D'Água, in the Sertão region of Paraíba State, Northeast Brazil. Blood samples were collected from 150 dogs for diagnosis by the DPP®, ELISA-S7®, ELISA-EIE® and qPCR assays. The prevalence was calculated considering the positivity in at least two tests. SaTScan® was used for spatial analysis. The prevalence of canine infection with Leishmania was 18.6% (28/150), with the rural area being identified as a risk factor (Odds Ratio (OR) = 2.93). The permanence of the dog loose during the night (OR = 0.33) and deworming (OR = 0.30) were identified as protective factors. A risk cluster was formed in the northern region of the urban area. Mãe D'Água showed a pattern of active transmission in the rural area, but VL control measures also need to be carried out in the urban area to prevent human cases and the spread of the disease in the risk zone.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose com distribuição mundial de grande impacto na saúde pública. O objetivo deste estudo foi verificar a prevalência da infecção canina por Leishmania infantum, os fatores associados à infecção e sua distribuição espacial no município de Mãe D'Água, na região do Sertão da Paraíba, Nordeste do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 150 cães para diagnóstico pelos ensaios DPP®, ELISA-S7®, ELISA-EIE® e qPCR. A prevalência foi calculada considerando-se a positividade em pelo menos dois testes. O SaTScan® foi utilizado para a análise espacial. A prevalência da infecção canina com Leishmania foi de 18,6% (28/150), sendo a zona rural identificada como fator de risco (Odds Ratio (OR) = 2,93). A permanência do cão solto durante a noite (OR = 0,33) e a vermifugação (OR = 0,30) foram classificadas como fatores de proteção. Um cluster de risco foi formado na região Norte da área urbana. Mãe D'Água apresentou um padrão de transmissão ativa na área rural, porém medidas de controle da LVC também precisam ser realizadas na área urbana para evitar casos humanos e a dispersão da doença na zona de risco.

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna / Avaliação de metodologia de vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral por detecção molecular em fauna silvestre atropelada

Abstract The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.

Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.

Spatial distribution of canine Leishmania infantum infection in a municipality with endemic human leishmaniasis in Eastern Bahia, Brazil / Distribuição espacial de infecção canina por Leishmania infantum em um município com leishmaniose humana endêmica no leste da Bahia, Brasil

Abstract Efforts to control a zoonotic disease such as visceral leishmaniasis (VL) caused by Leishmania infantum can be successful if they rely on comprehensive data on animal infection. In Bahia state, Brazil, human VL is endemic, yet some areas have no epidemiological data on canine L. infantum infection and canine leishmaniasis (CanL) to date. We aimed to perform an epidemiological study describing the spatial distribution and characterizing canine L. infantum infection in two districts of the municipality of Muritiba, where human cases have occurred. Brazilian official serodiagnostic protocol (ELISA and immunochromatographic tests), PCR and clinical examination were performed in 351 owned dogs. A seroprevalence of 15.7% (55/351) was found, and L. infantum identified in 88.8% (32/36) of PCR tested samples. Spatial distribution of positive dogs indicated infection in both urban and rural districts. There was no association between seropositivity and sex or breed, but dogs older than 2 years were 3.8 times more likely to be seropositive (95% CI 1.57 - 9.18) than younger dogs. Among seropositive dogs, 80% (44/55) had clinical manifestations of CanL: 75% (33/44) presented dermatopathy, 50% (22/44) emaciation, and 29.5% (13/44) ophthalmopathy. This is the first report on canine seroprevalence and natural L. infantum infection in Muritiba, Bahia.

Resumo O sucesso dos esforços para controlar uma doença zoonótica como a leishmaniose visceral (LV), causada por Leishmania infantum, depende de dados abrangentes sobre a infecção animal. Na Bahia, Brasil, embora a LV humana seja endêmica, diversos municípios, como Muritiba, ainda não dispõem de dados epidemiológicos sobre infecção por L. infantum e leishmaniose canina (LCan). Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico para descrever a distribuição espacial e caracterizar a infecção canina por L. infantum em dois distritos de Muritiba, onde notificam-se casos humanos. Foi aplicado o protocolo sorodiagnóstico oficial brasileiro (ELISA e imunocromatografia), PCR e exame clínico em 351 cães domiciliados. Encontrou-se uma soroprevalência de 15,7% (55/351) e positividade de 88,8% (32/36) na PCR para L. infantum. A distribuição espacial dos cães positivos indicou infecção em ambos os distritos, urbano e rural. Não houve associação entre soropositividade e sexo ou raça, mas cães com idade acima de 2 anos foram 3,8 vezes mais soropositivos (IC 95% 1,57 - 9,18). Dentre os cães soropositivos, 80% (44/55) apresentavam manifestações clínicas de LCan: 75% (33/44) apresentavam dermatopatia; 50% (22/44) emagrecimento e 29,5% (13/44) oftalmopatia. Este é o primeiro estudo a determinar a soroprevalência e confirmar a circulação natural de L. infantum e LCan em cães de Muritiba.

Validation of ELISA with recombinant antigens in serological diagnosis of canine Leishmania infantum infection

BACKGROUND Dogs are the main peridomiciliary reservoir of Leishmania infantum thus the correct diagnosis of infection is essential for the control of the transmission and treatment as well. However, the diagnosis is based on serological assays that are not fully effective. OBJECTIVE We aimed to establish an effective serological assay for the diagnosis of L. infantum infected dogs using Leishmania-derived recombinant antigens. METHODS Leishmania derived rK39-, rK28-, rKR95-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized using symptomatic and asymptomatic L. infantum-infected dogs. Then 2,530 samples from inquiry in endemic areas for VL were evaluated and the results compared with recommended assays by the Brazilian Ministry of Health (MH algorithm). Further samples from a cohort of 30 dogs were searched. FINDINGS For rK39-, rK28- and rKR95-ELISA the sensitivity was around 97% and specificity 100%. The positivity of these three ELISA in the inquiry samples was 27-28%, around 10% higher than the assays currently in use. When cohort samples were searched, we observed likely false-negative results (> 65%) with supposedly negative samples that turned positive six months later with the assays in use (MH algorithm). MAIN CONCLUSIONS For the diagnosis of L. infantum-infected dogs, rK39-based ELISA showed better diagnostic performance than other assays in use in Brazil and worldwide.

Spatial analysis of canine leishmaniasis in an area of transmission of the semi-arid region of the State of Paraíba, Brazil / Análise espacial da leishmaniose canina em uma área de transmissão do semiárido paraíbano, Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis is a widely distributed zoonosis and canine infection is an important indicator of risk for the occurrence of the disease in humans. The goal of this analysis was to study the spatial clustering of canine leishmaniasis (CL) in the municipality of Santa Luzia, state of Paraíba. For this, 749 samples of canine plasma were tested using three serological tests. The dog was considered positive if it reacted in two serological tests. The location of the residences was performed with a Global Positioning System receiver (GPS Garmin® eTrex 30), and used to perform georeferencing and spatial analysis. The prevalence of CL was 15.49% and it was observed that most cases of the urban area were concentrated in the Frei Damião neighborhood, on the outskirts of the city, where a high-risk cluster for the occurrence of the disease was formed (p = 0.02; RR = 2.48). No statistically significant cluster was observed in rural areas. CL is widely distributed in the municipality of Santa Luzia in a heterogeneous manner and with a tendency to urbanization. The areas identified with high prevalence and highest risk should be prioritized to maximize the efficiency of the Visceral Leishmaniasis Surveillance and Control Program and minimize the chance of new canine and human cases.

Resumo A leishmaniose visceral é uma zoonose amplamente distribuída, e a infecção canina é um importante indicador de risco para a ocorrência da doença em humanos. O objetivo foi estudar o comportamento espacial da leishmaniose canina (LC) no município de Santa Luzia, estado da Paraíba. Para tal, 749 amostras de plasma canino foram testadas por meio de três técnicas sorológicas. O cão seria considerado positivo se apresentasse duas sorologias reagentes. A localização das residências foi realizado pelo receptor de Sistema de Posicionamento Global (GPS Garmin® eTrex 30) e usado para a realização do georreferenciamento e análise espacial. A prevalência da LC foi de 15,49% e observou-se que a maioria dos casos de LC da zona urbana estava concentrada no bairro Frei Damião, localizado na periferia da cidade, onde se formou um cluster de alto risco para ocorrência da doença (p = 0,02; RR = 2,48). Nenhum cluster estatisticamente significativo foi observado na zona rural. A LC está amplamente distribuída no município de Santa Luzia, porém de forma heterogênea e com tendência à urbanização. As áreas identificadas com intensa prevalência e maior risco devem ser priorizadas para maximizar a eficiência do Programa de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral e minimizar a chance de novos casos caninos e humanos.

Epidemiology of canine visceral leishmaniasis in a vulnerable region in Brazil / Soroepidemiologia da leishmaniose visceral canina em uma região vulnerável do Brasil

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out.

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.

The spread of visceral leishmaniasis in Brazil: the first canine cases described in Ji-Paraná, Rondônia, Brazil / A disseminação da leishmaniose visceral no Brasil: os primeiros casos caninos descritos em Ji-Paraná, Rondônia, Brasil

Abstract Leishmaniases are zoonotic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania. The disease has two clinical manifestations described in humans: visceral (VL) and cutaneous (CL) leishmaniasis. In Brazil, there has been an expansion of human VL. The participation of the dog as a reservoir of Leishmania infantum, the agent of VL, is important for the epidemiology of the disease since canine cases generally precede human cases. The present study aimed to evaluate the occurrence of Leishmania spp. infection in dogs in the municipality of Ji-Paraná by PCR assays using blood samples. Leishmania DNA was detected in two of the 105 studied dogs. The PCR products were sequenced and confirmed that the two samples (1.90%) correspond to L. infantum. The dogs had allochthonous history. Therefore, the positive results found here should serve as a warning to public health agencies. This is because Ji-Paraná is the third municipality to register cases of canine leishmaniasis (CanL) in Rondônia state. Thus, reinforcing the importance of expanding studies on the epidemiology and surveillance of VL in the region.

Resumo As leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania. A doença apresenta duas manifestações clínicas: leishmaniose visceral (LV) e cutânea (LC). No Brasil, a LV está em expansão. A participação do cão como reservatório é importante para a epidemiologia da doença, pois os casos caninos geralmente precedem os humanos. O presente estudo avaliou a ocorrência de LV em cães (LVC) do município de Ji-Paraná por meio de ensaios de PCR, utilizando-se amostras de sangue. O DNA de Leishmania foi detectado em dois dos 105 cães estudados. Os produtos da PCR foram sequenciados e confirmaram que duas amostras (1,90%) eram Leishmania infantum. Os cães tinham histórico alóctone. Os resultados positivos encontrados servem de alerta aos órgãos públicos de saúde. Isso porque Ji-Paraná é o terceiro município a registrar casos de LVC no estado de Rondônia. Dessa forma, reforça-se a importância da ampliação dos estudos sobre a epidemiologia e vigilância da LV na região.

Molecular detection of Leishmania infantum in donkeys and mules under semiarid conditions in Brazil / Detecção molecular de Leishmania infantum em asininos e muares sob condições semiáridas

Abstract Visceral leishmaniasis is a parasitic zoonosis that mainly affects poorest and most vulnerable populations, and domestic dogs are considered to be the main source of infection to the vector and therefore humans. However, several studies have investigated the role of other vertebrate hosts in the disease cycle. In this context, the aim of the present study was to conduct a survey of Leishmania infantum infection in donkeys and mules living in a semiarid region of Brazil. Whole blood sampled from 72 equids (65 donkeys and 7 mules) was used to perform molecular diagnosis using the real-time polymerase chain reaction (qPCR) technique. A total of 25% of the samples (18/72) were positive through qPCR, but there were no significant differences between the species (donkeys or mules), sex (male or female) and abandonment situation of the animals (yes or no). Donkeys and mules living under semiarid conditions have high frequency of L. infantum infection. It is therefore worth assigning importance to these species in the epidemiological cycle of visceral leishmaniasis, either as potential reservoirs or just as an abundant food source for vectors.

Resumo A leishmaniose visceral é uma zoonose parasitária que afeta principalmente populações mais pobres e vulneráveis, e os cães domésticos são considerados as principais fontes de infecção para o vetor e, portanto, para os humanos. Porém diversos estudos têm pesquisado o papel de outros hospedeiros vertebrados no ciclo da doença. Neste contexto, objetivou-se realizar um levantamento da infecção por Leishmania infantum em asininos e muares, vivendo em região semiárida do Brasil. Foi utilizado sangue total de 72 equídeos (65 asininos e 7 muares) para a realização de diagnóstico molecular por meio da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase em Tempo Real (qPCR). Um total de 25% das amostras (18/72) resultaram positivas na qPCR, porém não houve diferença significativa entre as espécies (asininos e muares), sexo (macho e fêmea) e situação de abandono dos animais (sim ou não). Asininos e muares, vivendo em condições semiáridas, apresentam alta frequência de infecção por L. infantum, sendo válido atribuir importância a essas espécies no ciclo epidemiológico da leishmaniose visceral, seja como um reservatório em potencial, seja apenas como uma fonte alimentar abundante para os vetores.

Characterization of a municipality as free of canine visceral leishmaniasis in the context of One Health / Caracterização de um município como livre de leishmaniose visceral canina em um contexto de Saúde Única

Abstract Dogs are the main urban reservoir of Leishmania infantum, the causative agent of visceral leishmaniasis (VL), which is transmitted by sand flies. In the state of Paraná, the first detection of a positive dog for VL was in 2014, this year Paraná lost free status for this disease (VL). The objectives of this study were to determine the prevalence of canine visceral leishmaniasis in Palotina, the occurrence of vectors that may transmit Leishmania infantum, and the number of notifications of human visceral leishmaniasis cases from period 2010 to 2020. To determine the occurrence of canine visceral leishmaniasis, blood samples from 204 dogs were analyzed using the rapid test DPP® to detect anti-L. infantum antibodies. To investigate the occurrence of potential vectors, monthly collections were made at 18 points within the urban area of the municipality. The number of human visceral leishmaniasis cases was investigated from Epidemiological Surveillance records. None of the serologically tested dogs showed positive titration. Only two specimens of Lutzomyia neivai, one of Lutzomyia sp. and four of Brumptomyia brumpti specimens were collected. No human visceral leishmaniasis cases were reported. These results suggest that there is no evidence of circulation of L. infantum in Palotina.

Resumo Os cães são os principais reservatórios urbanos da Leishmania infantum, agente causador da leishmaniose visceral (VL), transmitida por vetores conhecidos como flebotomíneos. No Paraná, a primeira detecção de casos positivos caninos ocorreu em 2014, ano em que o Paraná perdeu o status de estado indene. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da leishmaniose visceral canina no município de Palotina, a ocorrência de vetores que possam transmitir Leishmania infantum e o número de notificação de casos de leishmaniose visceral humana, no período de 2010 a 2020. Para determinar a ocorrência da leishmaniose visceral canina, amostras de sangue de 204 cães foram analisadas, utilizando-se o teste rápido (DPP®) para detectar anticorpos anti-L. infantum. Com o objetivo de investigar a ocorrência de potenciais vetores, coletas foram realizadas mensalmente em 18 pontos na área urbana do município. O número de casos de leishmaniose visceral humana foi investigado a partir de registros da Vigilância Epidemiológica. Nenhum cão testado foi positivo no teste sorológico. Apenas dois espécimes de Lutzomyia neivai, uma de Lutzomyia sp. e quatro de Brumptomyia brumpti foram coletados. Nenhum caso de leishmaniose visceral humana foi notificado. Esses resultados sugerem que não há evidência da circulação de L. infantum em Palotina.

Comparison of serological and molecular tests to investigate Leishmania spp. infections in stray dogs from an area of intense visceral leishmaniasis transmission in Brazil / Comparação de testes sorológicos e moleculares para investigar infecções por Leishmania spp. em cães errantes de uma área de intensa transmissão de leishmaniose visceral no Brasil

Abstract The aim of this study was to investigate the level of exposure to Leishmania infection in stray dogs in an area of intense visceral leishmaniasis transmission in the state of Pernambuco, Brazil. Blood samples from 178 dogs were analyzed using serological and molecular assays: rapid immunochromatographic test (ICT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunofluorescence antibody test (IFAT), and conventional and quantitative polymerase chain reaction (cPCR and qPCR). Positivity values obtained with serological tests were 71.4% (127/178), 70.2% (125/178), and 50.6% (90/178) using ICT, ELISA, and IFAT, respectively, with 38.8% (69/178) of the dogs were simultaneously positive for all three tests. The positivity values obtained with cPCR and qPCR were 20.2% (36/178) and 38.8% (69/178), respectively, with 11.8% (21/178) testing positive in both molecular assays. Overall, 87.1% (155/178) were positive for anti-Leishmania spp. antibodies and/or Leishmania spp. DNA. Positivity to one or more tests was statistically associated with lymphadenomegaly, skin lesions, lymphocytosis, anemia and hyperproteinemia. The results of this study revealed a high level of exposure to Leishmania in stray dogs in an area of intense human visceral leishmaniasis transmission, suggesting that dogs play a role as reservoirs in the transmission cycle of this zoonosis.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar o nível de exposição à infecção por Leishmania em cães errantes de uma área de transmissão intensa de leishmaniose visceral no estado de Pernambuco. Amostras de sangue de 178 cães foram avaliadas por testes sorológicos e moleculares: teste imunocromatográfico (IC), ensaio imunoenzimático (ELISA), teste de imunofluorescência de anticorpos (RIFI), reação em cadeia da polimerase convencional e quantitativa (cPCR e qPCR). Os valores de positividade obtidos com os testes sorológicos foram 71,4% (127/178), 70,2% (125/178) e 50,6% (90/178) com IC, ELISA e RIFI, respectivamente. E com 38,8% (69/178) dos cães mostraram-se simultaneamente positivos aos três testes. Os valores de positividade obtidos por cPCR e qPCR foram 20,2% (36/178) e 38,8% (69/178), respectivamente. E com 11,8% (21/178) dos cães foram positivos em ambos os testes moleculares. No geral, 87,1% (155/178) foram positivos para anticorpos anti-Leishmania spp. e/ou material genético de Leishmania spp. A positividade a um ou mais testes foi estatisticamente associada à linfonodomegalia, lesões cutâneas, linfocitose, anemia e hiperproteinemia. Os resultados do estudo revelam um alto nível de exposição à Leishmania spp. em cães errantes em uma área de transmissão intensa de leishmaniose visceral humana, sugerindo que eles podem desempenhar um papel como reservatórios no ciclo de transmissão dessa zoonose.

Detection of Leishmania infantum amastigotes in neutrophil from peripheral blood in a naturally infected dog / Detecção de formas amastigotas de Leishmania infantum em neutrófilos do sangue periférico de cão naturalmente infectado

Abstract Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonotic disease of high lethality caused by Leishmania infantum in the Americas. In the infected dog, the amastigotes are scarce in blood, especially in the late phase of the disease. This study aimed to report a rare case of L. infantum amastigotes found in neutrophils from peripheral blood of a naturally infected dog in terminal phase of CVL, also describing its clinical status before and after treatment with miltefosine 2%. The dog, which presented as polysymptomatic and with classical signs and symptoms of CVL was submitted to the following tests: Dual Path Platform (DPP) rapid test, ELISA and parasitological examination of peripheral blood. Hematological and biochemical parameters were obtained before and after treatment. All diagnostic tests were positive for CVL. The identification of L. infantum amastigotes inside neutrophils from peripheral blood was confirmed through microscopy, and the species was confirmed by molecular analysis. At the end of the treatment, peripheral parasitemia was not detected, and improvements were observed in clinical and laboratorial parameters. Finally, this atypical finding can be used as example to raise discussions about the real immunological role of neutrophils in late phases of CVL and its clinical/therapeutic implications.

Resumo A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica de alta letalidade causada por Leishmania infantum nas Américas. No cão infectado, as formas amastigotas são escassas no sangue, principalmente na fase tardia da doença. Este estudo teve como objetivo relatar um caso raro de amastigotas de L. infantum encontradas em neutrófilos do sangue periférico de um cão naturalmente infectado e terminal da LVC, descrevendo também seu estado clínico antes e após o tratamento com miltefosina a 2%. O cão, que se apresentou como polissintomático e com sinais e sintomas clássicos da LVC foi submetido aos seguintes testes: teste rápido Dual Path Platform (DPP), ELISA e exame parasitológico de sangue periférico. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos foram obtidos antes e após o tratamento. Todos os testes diagnósticos foram positivos para LVC. A identificação de formas amastigotas de L. infantum, dentro de neutrófilos do sangue periférico foi confirmada por microscopia, e a espécie foi confirmada por análise molecular. Ao final do tratamento, não foi detectada parasitemia periférica, observando-se melhora dos parâmetros clínicos e laboratoriais. Por fim, esse achado atípico pode ser usado como exemplo para levantar discussões sobre o real papel imunológico dos neutrófilos nas fases tardias da LVC e suas implicações clínicas/terapêuticas.

Polymerase chain reaction using conjunctival swab samples for detecting Leishmania DNA in dogs / Reação em cadeia da polimerase usando amostras de Swab de conjuntiva para detecção de DNA de Leishmania em cães

Abstract The dog is the main domestic reservoir of Leishmania and font of infection for the vector, constituting an important host for the transmission of the parasite to humans. Non-invasive collection of swab samples for leishmaniasis diagnosis has been a promising alternative. This study analyzed the positivity of polymerase chain reaction (PCR) for the diagnosis of canine leishmaniasis in conjunctiva samples. DNA extraction was performed using SDS 20% and PCR was performed using 13A/13B primers that amplify 120-bp of Leishmania kDNA. Of the 77 dogs analyzed, 50 (64.93%) had ocular changes: 25 (32.47%) dogs had periocular lesion, 41 (53.25%) dogs had purulent eye discharge, and 17 (22.08%) dogs had both signals. PCR was positive in 35 dogs (45.45%), and there was no significant difference between dogs with and without ocular signals (p=0.4074). PCR positivity was significant higher in dogs without periocular injury (p=0.0018). Conjunctive PCR, a less invasive, fast, and painless collection technique, is indicated to complement the diagnosis, especially in dogs without periocular injury, independent of the presence of purulent eye discharge.

Resumo O cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania e também fonte de infecção para o vetor, constituindo um importante hospedeiro para a transmissão do parasita ao homem. A coleta não invasiva de amostras em swab para diagnóstico das leishmanioses tem sido uma alternativa promissora. Este estudo analisou a positividade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o diagnóstico de leishmaniose canina em amostras de conjuntiva. A extração do DNA foi realizada com SDS 20%. A PCR foi realizada com primers 13A/13B que amplificam 120-pb do kDNA de Leishmania. Dos 77 cães analisados, 50 (64,93%) tiveram alterações oculares; 25 (32,47%) cães tiveram uma lesão periocular; 41 (53,25%) tiveram secreção ocular purulenta e 17 (22,08%) cães tiveram ambos os sinais. A PCR foi positiva em 35 cães (45,45%) e não houve diferença significativa em cães com e sem sinais oculares (p = 0,4074). A positividade da PCR foi significativamente maior em cães sem lesão periocular (p = 0,0018). PCR em conjuntiva, uma técnica de coleta menos invasiva, rápida e indolor, é indicada para complementar o diagnóstico, principalmente em cães sem lesão periocular, independentemente da presença de secreção ocular purulenta.

Investigation of canine visceral leishmaniasis in a non-endemic area in Brazil and the comparison of serological and molecular diagnostic tests

Abstract INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is an important zoonosis in Brazil. Previous identification of parasitized dogs can also help prevent the disease in humans, even in non-endemic areas of the country. The Brazilian Ministry of Health recommends diagnosis in dogs using a DPP® (rapid test) as a screening test and an immunoenzymatic assay (ELISA) as a confirmatory test (DPP®+ELISA), and culling infected dogs as a legal control measure. However, the accuracy of these serological tests has been questioned. METHODS: VL in dogs was investigated in a non-endemic area of the São Paulo state for three consecutive years, and the performances of different diagnostic tests were compared. RESULTS: A total of 331 dog samples were collected in 2015, 373 in 2016, and 347 in 2017. The seroprevalence by DPP®+ELISA was 3.3, 3.2, and 0.3%, respectively, and by indirect immunofluorescence assay (IFA), it was 3.0, 5.6, and 5.5%, respectively. ELISA confirmed 18.4% of DPP® positive samples. The concordance between the IFA and DPP® was 83.9%. The concordance between IFA and DPP®+ELISA was 92.9%. A molecular diagnostic test (PCR) was performed in 63.2% of the seropositive samples, all of which were negative. CONCLUSIONS: In non-endemic areas, diagnostic tests in dogs should be carefully evaluated to avoid false results.